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维生素B1检测试剂盒(荧光光度法)用于定量检测血清、血浆、组织等样品中的维生素B1(硫胺素)含量。

利用Vitamin B1水溶液在碱性盐溶液中能被氧化成蓝色的硫色素(一种荧光化合物)，在紫外线下硫色素发出荧光，在激发波长365nm，发射波长435nm，在没有其他荧光物质干扰时荧光强度与硫色素的浓度呈正比，可定量检测维生素B1的含量，如果样品中存在干扰物质，可用沸石吸附Vitamin B1，以便去除待测样品中干扰荧光测定的杂质。

• 在上述操作中，要严格避免Vitamin B1受到阳光直射。
  
• 待测样品如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 稀释组织匀浆液：按10×组织匀浆液∶蒸馏水＝1∶9的比例稀释，获得1×组织匀浆液。
  
• 稀释标准品：取适量的Vitamin B1标准(100μg/mL)，按Vitamin B2标准(100μg/mL)∶蒸馏水=1∶99稀释成Vitamin B1标准(1μg/mL)，4℃避光保存。
  
• 制备亚硫酸盐工作液：取一支亚硫酸盐100mg粉末，充分溶解于0.5mL蒸馏水中配制成200mg/mL的亚硫酸盐工作液，即配即用。
  
• 制备样品(选做)：取待测材料如麦麸等，准确称量2～5g，加入研磨器内，加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，再次用1×组织匀浆液研磨，最后一并倒入50mL离心管，补充1×组织匀浆液至25mL，充分混匀，沸水中孵育30min，冷却至室温，用样品校正液调节pH至4.5，3500g离心10min，取上清加入2g沸石，振摇30min，弃液，蒸馏水清洗沸石2次，弃洗液，加入2.5mL样品洗脱液搅拌沸石，洗脱2～3次，将洗脱液合并，并用样品洗脱液定容至10mL，即为样品净化液。
  
• Vitamin B1氧化：
  
  • 按下表操作，注意避光操作。
    

    加入物(mL)	空白管	测定管	标准空白管	标准管
    Vitamin B1标准(1μg/mL)	－	－	2.5	2.5
    样品净化液	2.5	2.5	－	－
    Vitamin B1氧化液	1.5	0.9	1.5	0.9
    Vitamin B1检测液	－	0.6	－	0.6
    振摇15s
    正丁醇	5	5	5	5

  • 剧烈振摇90s，静置分层，吸取下层溶液丢弃；上层溶液加入1.5g硫酸盐混匀使脱水。
• Vitamin B1检测：选用恰当的滤色片，测定的激发波长为365nm，发射波长为435nm，提前预热仪器30min，分别检测测定管和标准管的荧光值，同时向空白管和标准空白管的剩余液中加入0.05mL亚硫酸盐工作液，立即混匀，在20～30s内测出各管的荧光值，作为各自的空白值。